РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НЕЙТРАЛИЗУЮЩИХ АНТИТЕЛ K ПЕМБРОЛИЗУМАБУ B СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА HA ОСНОВЕ ИНГИБИРОВАНИЯ СВЯЗЫВАНИЯ ПЕМБРОЛИЗУМАБА C ЕГО МИШЕНЬЮ PD-1 МЕТОДОМ ИФА

Аннотация:

Гуманизированные моноклональные антитела могут вызывать нежелательный гуморальный иммунный ответ у пациентов — образование антител к терапевтическому белковому препарату. Нейтрализующие антилекарственные антитела являются одним из основных факторов, влияющих на безопасность и эффективность проводимой терапии. При невозможности использовать тесты для определения нейтрализующих антител на основе клеточных культур альтернативой могут служить методы конкурентного связывания лекарственного средства и его лиганда. Пембролизумаб относится к противоопухолевым препаратам широкого спектра и представляет собой гуманизированное IgG4 каппа-антитело к рецептору запрограммированной клеточной смерти-1 (PD-I), которое блокирует взаимодействие рецептора с его лигандами PD-Ll и PD-L2. B связи со сложностью проведения анализа применение культурального клеточного теста для пембролизумаба невозможно, так как высок риск получения недостоверных результатов. Цель — разработка и валидация методики определения нейтрализующих антител к пембролизумабу в сыворотке крови человека на основе ингибирования связывания пембролизумаба с его мишенью PD-L B исследовании был использован экспериментальный препарат пембролизумаб RPH-075 (АО «Р-Фарм», Россия). B качестве положительного контрольного образца на нейтрализующие антитела использовали Anti-PembroLlzumab антитела KRlBioLISATMAnti-Pembrolizumab (KEYTRUDAe) ELISA, Индия). Определение антител проводили методом ИФАс применением кислотной диссоциации иммунного комплекса и с использованием техники ACE (Affinity capture elution). Была разработана и валидирована методика выявления нейтрализующих антител к пембролизумабу, основанная на ингибировании пембролизумаба с его мишенью PD-I в сочетании с техникой АСЕ. Разработанная методика была валидирована по показателям: селективность, чувствительность, специфичность, «хук»-эффект, толерантность к присутствию лекарственного препарата, прецизионность. Благодаря применению подходов предварительной обработки образцов (кислотная диссоциация, техника АСЕ) для анализа нейтрализующих антител, была достигнута чувствительность 100 нг/мл в присутствии циркулирующего пембролизумаба 40 мкг/мл. Также в данной работе был обоснован метод расчета предела исключения, чувствительности и селективности на основании ROC-анализа и плавающего предела исключения (PSCP) через средние арифметические значения оптической плотности NC и LPC в каждом индивидуальном аналитическом планшете. Разработанная методика определения нейтрализующих антител к пембролизумабу может быть использована для оценки нежелательной иммуногенности препарата пембролизумаба на стадии клинических испытаний.

Авторы:

Издание: Медицинская иммунология
Год издания: 2025
Объем: 12с.
Дополнительная информация: 2025.-N 6.-С.1423-1434. Библ. 26 назв.
Просмотров: 2