17бета-ГИДРОКСИСТЕРОИДДЕГИДРОГЕНАЗА ИЗ ГРИБА Cochliobolus lunatus: БИОСИНТЕЗ В КЛЕТКАХ АКТИНОБАКТЕРИЙ Mycolicibacterium nеоаurum И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

Аннотация:

17бета-Гидроксистероиддегидрогеназа (17бета-ГСД) - фермент, используемый в биотехнологии получения тестостерона из фитостерина. Гетерологичная 17бета-ГСД из гриба Cochliobolus lunatus катализирует NADPH-зависимое восстановление 17-оксогруппы андростендиона/андростадиендиона, образующихся в клетках миколицибактерий в результате присущего им полиферментного процесса окисления алифатической боковой цепи фитостерина, с образованием тестостерона/дельта1-дегидротестостерона соответственно. Объектом исследования являлась гетерологичная 17бета-ГСД из гриба С. lunatus (17бета-ГСДcl) с 6xНis-меткой (6хН1з-17бета-ГСДсl), синтезированная в клетках актинобактерий Mycolicibacterium пеоаurum. Выделение и очистку рекомбинантного фермента проводили с помощью аффинной хроматографии. Наибольшую активность ферментный препарат 6хHis-17бета-ГСДcl проявлял по отношению к андростендиону. Активность 6хНis-17бета-ГСДсl зависела от NADPH и проявлялась в интервале pH от 6,0 до 9,0 с оптимумом при pH 7,0. Анализ кинетических характеристик показал, что свойства гетерологичного фермента 6хНis-17бета-ГСДcl, синтезированного в клетках М. пеоаurum, сравнимы с таковыми, полученными для фермента 17бета-ГСД, выделенного из гриба С. lunatus, а также для рекомбинантных ферментов 17бета-ГСДcl, синтезированных в клетках Escherichia coli и Mycolicibacterium smegmatis. Результаты расширяют знания о микробных 17бета-ГСД и свидетельствуют о перспективности применения рекомбинантных штаммов М. пеоаигит, экспрессирующих кодон-оптимизированную последовательность кДНК, кодирующую 17бета-ГСДсl из гриба С. lunatus, для получения тестостерона из фитостерина.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2025
Объем: 14с.
Дополнительная информация: 2025.-N 9.-С.1351-1364. Библ. 31 назв.
Просмотров: 1