ПРОСТРАНСТВЕННАЯ СТРУКТУРА С-КОНЦЕВОГО ДОМЕНА ГЕМОЛИЗИНА II Bacillus cercus СТАБИЛИЗИРУЕТСЯ В СОСТАВЕ ПОЛНОРАЗМЕРНОГО ТОКСИНА

Аннотация:

Гемолизин II (Hlyll) - один из ключевых патогенных факторов Bacillus cereus, порообразующий токсин с пространственной структурой типа бета-баррель, обладающий С-концевым удлинением из 94 а.о., обозначаемый как С-концевой домен Hlyll (HlyllCTD). В данной работе проведен сайт-направленный мутагенез аминокислотных остатков, лежащих на поверхности белковой глобулы HlyllCTD. Методом иммуноферментного анализа показано, что моноклональные антитела HlyIIC-16 и НIуIIС-23, полученные против HlyllCTD, взаимодействовали с интактным HlyllCTD гораздо эффективнее, чем с полноразмерным токсином и химерным белком - HlyllCTD, слитым с SlyD. Антитела HlyIIC-16 и НIуIIС-23 эффективно ингибировали взаимодействие друг друга с иммобилизованным HlyllCTD в иммуноферментном анализе, что свидетельствовало о близости их эпитопов на поверхности молекулы HlyllCTD. Для определения эпитопов HlyllC-16 и НIуIIС-23 использовали фаговый дисплей, сайт-направленный мутагенез и клонирование генов отдельных частей молекулы HlyllCTD. Пространственное моделирование HlyllCTD, слитого с SlyD, с использованием программы AlphaFold позволило предположить расположение эпитопов HlyIIC-16 и НIуIIС-23 на участке Gly341-Gly364 белка Hlyll. Продемонстрировано, что С-концевой домен может одновременно находиться в нескольких структурных состояниях (изоформах). В составе водорастворимой формы мономера полноразмерного токсина наблюдается переход пространственной структуры HlyllCTD в стабильную форму.

Авторы:

Издание: Биоорганическая химия
Год издания: 2025
Объем: 12с.
Дополнительная информация: 2025.-N 6.-С.1063-1074. Библ. 29 назв.
Просмотров: 4