ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ АНТИТЕЛ IgG И IgA МЕТОДОМ ПОЛЯРИЗАЦИИ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ С ПРИМЕНЕНИЕМ ФЛУОРЕСЦЕНТНО-МЕЧЕННЫХ РЕКОМБИНАНТНЫХ НАНОТЕЛ

Аннотация:

Количественный, быстрый и высокопроизводительный анализ иммуноглобулинов IgG и IgA необходим для определения содержания этих белков и ассоциированных с ними молекул в физиологических жидкостях больных. Анализ этих белков необходим при диагностике дефицита специфических антител в качестве вспомогательного теста для выявления общего вариабельного иммунодефицита, а также для оценки степени риска пациентов с низким уровнем IgA. Определение содержания IgG может помочь при назначении ревакцинации пациентам и поддержки стратегии их лечения, использоваться для мониторинга гуморальной иммунной системы пациента, а также при разработке и последующем производстве большинства терапевтических антител в биофармацевтике. Миниатюрные рекомбинантные однодоменные антитела (нанотела) обладают рядом преимуществ перед классическими антителами, таких как относительная простота их наработки, высокая стабильность в широком диапазоне значений температуры и pH, способность узнавать высокослецифические конформационные эпитопы целевого белка, а также возможность использования их в качестве зондов для детекции более крупных целевых белков-антигенов в методе поляризации флуоресценции. Получены и охарактеризованы флуоресцентно-меченные нанотела FlTC-anti-lgG и FITC-anti-IgA к IgG и IgA человека. Определены комплексов FITC-anti-IgG*lgG и FlTC-anti-IgA*IgA, подтверждающие высокую аффинность иммунореагентов. Показана возможность специфичного определения содержания IgG и IgA в сыворотке крови человека в диапазоне 35-120 мкг/мл (для IgA) и 75-260 мкг/мл (для IgG). Протестированы 18 сывороток человека на содержание IgG и IgA, количество антител в образцах подтверждено определением с использованием коммерческих иммуноферментвых наборов. Показано, что FITC-anti-IgG и FITC-anti-IgA не взаимодействуют с другими белками человека: альбумином, плазминогеном, фибриногеном, лактоферрином и трансферрином. Тестирование сывороток человека и животных с FlTC-anti-lgG и FITC-anti-IgA продемонстрировало специфичное связывание с антисыворотками человека и обезьяны, но не с сыворотками животных: быка, собаки, кошки, кролика и овцы. Таким образом, метод FPIA может быть использован для быстрого и специфичного определения IgG и IgA человека.

Авторы:

Издание: Биоорганическая химия
Год издания: 2025
Объем: 13с.
Дополнительная информация: 2025.-N 6.-С.1093-1105. Библ. 42 назв.
Просмотров: 2