РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ ХРОМАТО-МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКОЙ МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АПИГЕНИНА, АПИГЕТРИНА И ЛЮТЕОЛИНА В ПЛАЗМЕ МЫШЕЙ

Аннотация:

В настоящее время практический интерес исследователей направлен на изучение биомедицинского потенциала вторичных метаболитов растений с целью создания новых лекарственных средств. Флавоноиды представляют собой многочисленный класс природных фенольных соединений, обладающих широким спектром биологической активности. Особое внимание уделяется способности некоторых флавонов (апигенина и лютеолина, их гликозида апигетрина) к подавлению роста злокачественных опухолей. Однако низкие концентрации этих полифенолов в растительных матриксах не позволяют достоверно оценить фармакокинетику в организме человека. В связи с этим актуальной биоаналитической задачей является разработка точных и воспроизводимых методик с применением высокотехнологичных гибридных методов анализа. Цель исследования - разработка и валидация хромато-масс-спектрометрической методики количественного определения апигенина, апигетрина и лютеолина в плазме крови мышей. Для разработки методики количественного определения флавонов использовали высокоэффективный жидкостной хроматограф Agilent Technologies 1260 Infinity II и масс-спектрометр АВ Sciex QTrap 3200 MD. Хроматографическое разделение осуществляли на аналитической колонке Agilent InfinityLab Poroshell 120 ЕС-С18 с градиентной подвижной фазой, содержащей 0,1%-ную муравьиную кислоту и ацетонитрил. Для детектирования аналиты и внутренний стандарт варфарин ионизировали электрораспылением в режиме отрицательных ионов с использованием мониторинга множественных реакций. Пробоподготовка плазмы крови мышей заключалась в осаждении белков метанолом. В результате подобраны оптимальные условия обращенно-фазового хроматографического разделения апигенина, апигерина, лютеолина и варфарина с временами удерживания от 5,3 до 7,8 мин. Каждое соединение в оптимальных условиях электрораспылительной ионизации подвергается протонированию с образованием ионов состава [М-Н] и фрагментации на два характеристических иона-продукта. Разработана методика одновременного количественного ВЭЖХ-МС/МС определения флавонов в плазме крови мышей, характеризующаяся линейностью в широком диапазоне концентраций и низким пределом количественного определения 1,0 нг/мл, значениями степени извлечения аналитов в диапазоне 90,8-100,4%. Валидационные характеристики методики удовлетворяют соответствующим нормативным требованиям селективности, влияния матричного эффекта, межсерийной точности и прецизионности. Выводы. Результаты валидационных испытаний свидетельствуют о пригодности разработанной экспрессной и достаточно точной биоаналитической методики количественного определения трех структурно родственных флавонов при совместном присутствии в плазме крови мышей. Метрологические характеристики методики позволяют использовать ее для проведения аналитической части фармакокинетических исследований лекарственных препаратов, содержащих как индивидуальные флавоноиды так и растительные экстракты.

Авторы:

Издание: Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии
Год издания: 2025
Объем: 11с.
Дополнительная информация: 2025.-N 12.-С.58-68. Библ. 20 назв.
Просмотров: 2