ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ ТРАНСФОРМАЦИИ Mycobacterium abscessus МЕТОДОМ ЭЛЕКТРОПОРАЦИИ

Аннотация:

Эффективная трансформация микобактерий и, в частности, Mycobacterium abscessus, значительно осложняется специфическим строением их клеточной стенки. Наиболее широко используемым и эффективным методом введения молекул плазмидной и фаговой ДНК в клетки микобактерий является электропорация. На эффективность электропорации существенное влияние оказывают многие факторы, такие как природа ДНК, селективный маркер, добавки в питательную среду, параметры электрического импульса, вид и штамм микобактерии-реципиента. Хотя условия эффективной электропорации для медленнорастущего патогена Mycobacterium tuberculosis и быстрорастущего сапрофита Mycobacterium smegmatis подробно описаны в литературе, рекомендации относительно М. abscessus носят разрозненный и даже противоречивый характер. В настоящей работе установлено, что эффективная трансформация М. abscessus АТСС 19977 репликативным вектором pMV261 методом электропорации возможна при использовании культуры в логарифмической фазе роста в достаточно широком диапазоне значений оптической плотности ОП600 = 0.8—4.2, при этом охлаждение несущественно влияло на частоту трансформации. Критически важным параметром была масса вносимой ДНК. Установлено, что число полученных трансформантов в расчете на 1 мкг ДНК возрастало пропорционально квадрату ее массы, при внесении менее 0.5 мкг плазмидной ДНК эффективность электропорации была недостаточной.

Авторы:

Издание: Прикладная биохимия и микробиология
Год издания: 2025
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2025.-N 5.-С.487-493. Библ. 31 назв.
Просмотров: 1