ОПТИМИЗАЦИЯ СТРУКТУРЫ РНК ПРИВОДИТ К УВЕЛИЧЕНИЮ БИОСИНТЕЗА L-АСПАРАГИНАЗЫ Е.coli ПРИ ОВЕРЭКСПРЕССИИ ЕЕ ГЕНА

Аннотация:

Разработана высокоэффективная система экспрессии рекомбинантной L-аспарагиназы II типа Escherichia coli (КФ 3.5.1.1) на основе синтетического гена, оптимизированного по энергии образования шпилек вторичной структуры 5'-области мРНК. Создан штамм-продуцент Е. coli BL21[DE3]/pET28a-AsnSYN, обеспечивающий накопление до 291 ± 9 мг/л ферментативно активного белка (44.5 ± 2.6 мг/ (л*ОЕ)) при культивации в перемешиваемых колбах, что на 50% превышает показатели контрольного штамма с природным геном при времени индукции 3 ч. Оптимизация кодонного состава гена позволила увеличить энергию образования вторичной структуры мРНК в 5'-области с -70 до -47 ккал/моль, что, как мы предполагаем, способствовало улучшению эффективность трансляции. Для разработанного штамма-продуцента аспарагиназа, соответствующая фармакопейным требованиям по чистоте, может быть получена с общим выходом >25% и удельной активностью >250 МЕ/мг. Препарат не содержит видимых примесей по данным электрофореза и менее 3% мультимерных форм по гель-фильтрации. Полученные результаты демонстрируют перспективность использования синтетических генов с оптимизацией структуры ДНК для промышленного производства терапевтических ферментов.

Авторы:

Издание: Прикладная биохимия и микробиология
Год издания: 2025
Объем: 13с.
Дополнительная информация: 2025.-N 6.-С.547-559. Библ. 17 назв.
Просмотров: 2