РЕПОРТЁРНАЯ СИСТЕМА ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ G-КВАДРУПЛЕКСОВ В ПРОМОТОРНОЙ ОБЛАСТИ ГЕНА ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПТАЗЫ ТЕЛОМЕРАЗЫ ЧЕЛОВЕКА

Аннотация:

В 80-100% случаев трансформация соматических клеток человека в опухолевые ассоциирована с повышенной экспрессией каталитической субъединицы теломеразы - обратной транскриптазы (hTERT). Ингибирование эффективности транскрипции гена hTERT в опухолевых клетках может стать одним из подходов к противоопухолевой терапии. Промотор hTERT содержит G-богатую область длиной 68 нуклеотидов, которая в определённых условиях in vitro способна формировать G-квадруплексы (G4). Известно, что G4 препятствуют работе РНК-полимераз человека, поэтому стабилизацию О4-структуры в промоторе можно рассматривать как возможный путь снижения экспрессии hTERT. Для доказательства образования G4 фрагментом G-богатой последовательности промотора hTERT в двуспиральном контексте в условиях суперскрученности ДНК сконструированы репортёрные конструкции на основе плазмиды pRFPCER, содержащие гены флуоресцентных белков (RFP и Cerulean) и последовательность центрального G4 промоторной области hTERT. Продемонстрировано образование центрального G4 промоторной области hTERT в полученных конструкциях методом «остановки» полимеразы, показано влияние замен G228A и G250A в составе G4 на его стабильность в физиологических условиях. Установлено, что низкомолекулярные лиганды BRACO19 и ТМРуР4 - хорошо изученные стабилизаторы С4-структуры, могут эффективно взаимодействовать с G4 hTERT в диапазоне концентраций 5-25 мкМ.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2025
Объем: 16с.
Дополнительная информация: 2025.-N 11.-С.1765-1780. Библ. 52 назв.
Просмотров: 1