ИЗУЧЕНИЕ РЕАКЦИИ ЦИТОХРОМА bd-I Escherichia coli В ПОЛНОСТЬЮ ВОССТАНОВЛЕННОМ СОСТОЯНИИ С ЦИАНИДОМ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СПЕКТРОСКОПИИ ПОГЛОЩЕНИЯ И КРУГОВОГО ДИХРОИЗМА

Аннотация:

Ранее мы начали исследование реакции изолированного солюбилизированного цитохрома bd-I Escherichia coli, восстановленного дитионитом, с цианидом [Borisov и Arutyunyan (2024) J. Inorg. Biochem., 259, 112653]. Настоящая работа является продолжением этого исследования. С помощью методов спектроскопии поглощения и КД получены следующие новые результаты. 1) Мембранная форма полностью восстановленного (FR) фермента также способна связывать цианид. Значения кажущейся константы диссоциации и константы скорости второго порядка составляют 81,1 ± 7,8 мМ KCN и 0,11 ± 0,01 М-1-с-1 соответственно. Это противоречит данным работ других исследователей, согласно которым оксидаза bd-I, находящаяся в нативных мембранах, в FR-состоянии не связывает цианид. 2) СО, добавленная к циано-аддукту как мембранной, так и изолированной солюбилизированной формы FR-цитохрома bd-I, вытесняет цианид, приводя к образованию комплекса фермента с СО. Это свидетельствует об обратимости связывания цианида с белком. Для насыщения сайта связывания оксидазы СО в присутствии 100 мМ KCN требуется гораздо больше СО, чем в случае добавления СО к необработанному цианидом ферменту. СО и цианид конкурируют между собой за связывание с одним и тем же сайтом в оксидазе - гемом d2f, причём СО, являясь более сильным лигандом, такую конкуренцию у цианида выигрывает. 3) Исследовано влияние цианида на оптическую активность FR-цитохрома bd-I. Спектры КД FR-фермента, полученные до и после обработки цианидом, свидетельствуют о том, что образование циано-аддукта гема d2+ приводит к значительному ослаблению экситонных взаимодействий между гемом d2+ и гемом b595 2+. Предложены схемы взаимодействия цианида и СО в присутствии избытка цианида с активным центром FR-фермента.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2025
Объем: 14с.
Дополнительная информация: 2025.-N 12.-С.2049-2062. Библ. 103 назв.
Просмотров: 5