КЛОНИРОВАНИЕ НОВОГО ГЕНА МЫШИ, БЕЛОК КОТОРОГО ИММУНОЛОГИЧЕСКИ РОДСТВЕНЕН RecA-БЕЛКУ Escherichia coli

Аннотация:

Используя метод иммуноскрининга кДНК библиотеки из семенников мыши аффинно-очищенными поликлональными антителами к RecA-белку из Escherichia coli, провели клонирование фрагмента нового гена мыши длиной 1730 пн. Методом Нозерн-гибридизации тотальной РНК, полученной из соматических и мейотических тканей мыши, было показано, что данный ген транскрибируется в семенниках мыши, размер транскрипта составляет около 10 тпн. Анализ прочитанной последовательности кДНК фрагмента выявил клонирование концевой части гена, на что указывает наличие сайта полиаденилирования -ААТААА- на конце фрагмента. Сравнительный анализ нуклеотидной последовательности клонированного гена выявил, что он имеет мотивы гомологии по плюс-цепи с геном RAD50 мыши; по минус-цепи в 378 пн 96%-ную гомологию с кДНК фрагментом H.d74l-fffomo sapiens, а по всей длине минус-цепи - 50%-ную гомологию с прокариотическими генами FTSZ/A. Исследуемый кДНК-фрагмент имел две рамки считывания, расположенные в плюс- и минус-цепи. Рамкой с плюс-цепи (смысловой) кодируется гипотетический белок (44 кДа), содержащий серин/пролин/треонин-богатые участки и на 25-30% гомологичный ряду ядерных, ДНК-связывающих эукариотических белков; рамкой с минус-цепи кодируется гипотетический белок (26.6 кДа), на 50% гомологичный белкам генов FTSZ различных прокариот. Анализ сходства белка в 44 кДа с белком гена RECA из Е. coli, не показав достоверной гомологии между ними, выявил их идентичность по пяти аминокислотным остаткам, которые способны участвовать в формировании эпитопа антигена, узнающего паратоп антитела (RecA-белок), для последующего эпитоп-паратопного связывания данных белков.

Авторы:

Издание: Генетика
Год издания: 2000
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2000.-N 5.-С.613-621
Просмотров: 24