ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО АНТИГЕНА БЕЛКА Р52 ЦИТОМЕГАЛОВИРУСА ЧЕЛОВЕКА (HCMV)

Аннотация:

Изучение данных литературы позволило выявить среди белков HCMV наиболее сильные антигены — фосфопротеины ppl50(UL32) и p52(UL44). Теоретический компьютерный анализ эпитопов белка р52 выявил основные антигенные детерминанты, не имеющие перекрестов с антигенами других вирусов. Наработан вирусный материал (штамм AD169) и выделена геномная ДНК. Амплификация участка гена UL44, кодирующего уникальные детерминанты, выявила наличие ПЦР-фрагменто с требуемой электрофоретической подвижностью. Фрагмент клонирован в векторе pLBE. Специфичность клонирования подтверждена рестрикционным анализом теоретических сайтов. Изучена нуклеотидная последовательность клонированного фрагмента гена UL44 методом Максама—Гилберта. Клонирование в экспрессирующих бактериальных векторах позволило получить слитую с бета-галактозидазой и чистую форму рскомбинаптного белка р52 HCMV. Используя набор HCMV-положительных и отрицательных сывороток доноров, а также панель HCMV-сывороток фирмы "ABBOT", методами иммуноферментного анализа было показано, что рскомбинантный р52 повышает чувствительность и специфичность ранее полученного рскомбинантного рр150 как антигена к HCMV-IgC и к HCMVIgM. Уровень чувствительности и специфичности составляет 100% с достоверностью 98—99%. В мировой клинике герпетические инфекции, в том числе и цитомегалия, занимают одно из первых мест по сложности диагностики и распространенности этих инфекций. 60—80%, а в некоторых регионах до 99% взрослого населения имеют специфические антитела. В настоящее время эпидемическая ситуация с цитомегаловирусной инфекцией в Сибири не изучена и серологическая диагностика HCMV не распространена. Авторы исследовали район генома HCMV (штамм AD-169) с целью дальнейшего клонирования в экспрессирующих векторах и получения рекомбинантных белков для диагностики HCMV-специфичных IgM.

Авторы:

Издание: Молекулярная генетика ,микробиология и вирусология
Год издания: 2000
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2000.-N 4.-С.24-29
Просмотров: 61