АКРИДИНОРАНЖ КАК ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ ЗОНД ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ АЦИДИФИКАЦИИ И ЭКЗОЦИТОЗА СИНАПТИЧЕСКИХ ВЕЗИКУЛ В СИНАПТОСОМАХ

Аннотация:

Использовали флуоресцентный зонд акридиноранж (АО), реагирующий на градиент рН в кислых компартментах, для исследования процессов ацидификации и экзоцитоза синаптических везикул в синаптосомах мозга крыс. В присутствии синаптосом наблюдалось тушение флуоресценции АО, свидетельствующее о наличии кислого компартмента. В синаптосомах, пермеабилизованных дигитонином или осмотическим шоком, MgATP дополнительно вызывал сильную ацидификацию, которая блокировалась конканамицином А, специфическим ингибитором H+-АТРаз V-типа. Такая АТРаза, как известно, присутствует в мембране синаптических везикул. АТР-зависимая ацидификация, хотя и более слабая, наблюдалась и в синаптосомах, не подвергавшихся пермеабилизации, что указывает на присутствие незамкнутых синаптосом, причем их содержание (ок. 20%) практически не зависело от метода выделения. Деполяризация синаптосом 30 мМ КС1 вызывала немедленное, хотя и небольшое, повышение флуоресценции АО, которое устранялось в отсутствие Са2+ или при замене КС1 на NaCl. Такая реакция соответствует выбросу под действием деполяризации кислого содержимого из популяции готовых к экзоцитозу синаптических везикул, составляющей ок. 5% от общего числа. Никакого дальнейшего выброса АО после немедленной фазы не наблюдалось, что свидетельствует о чрезвычайно высокой скорости реацидификации. Результаты показывают, что с помощью АО можно надежно регистрировать внутритерминальные рН градиенты в синаптосомах. Их можно использовать для независимой оценки размера популяции синаптических везикул, участвующей в быстрой фазе выброса нейромедиаторов. Кроме того, путем сравнения скорости АТР-зависимой ацидификации в интактных и пермеабилизованных синаптосомах можно определить содержание незамкнутых (поврежденных) синаптосом.

Авторы:

Издание: Нейрохимия
Год издания: 2000
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2000.-N 4.-С.303-308
Просмотров: 24