ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ФАГОВОГО ДИСПЛЕЯ ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ОДНОНУКЛЕОТИДНЫХ РАЗЛИЧИЙ В ГЕНАХ

Аннотация:

Разработана экспериментальная стратегия селекции фагов из библиотеки нитчатого фага fl E.coli с рандомизированными пептидами на поверхности белка оболочки, специфически распознающих неспаренные нуклеотидные основания в молекуле двухцепочечной ДНК. Стратегия основана на использовании фагового дисплея и гетеродуплексных молекул двухцепочечных ДНК, полученных с помощью биотинилированного ПЦР-продукта и парамагнитных частиц со стрептавидином. На первой стадии проводили связывание фаговых частиц из библиотеки с искусственным гетеродуплексом, имеющим несколько неспаренных оснований. После отделения несвязавшихся фагов и диссоциации фагов, взаимодействующих с ДНК, проводили стадию "вычитания" на гомодуплексе для удаления фагов, связывающихся с участками ДНК, содержащими только спаренные основания. Отселектированные подобным образом фаги обладали способностью отличать дуплексы с одиночными неспаренными основаниями внутри фрагмента ДНК от дуплексов с полностью спаренными основаниями. Способность фагов аффинно связываться с планшетами без потери функциональной активности может быть использована для автоматизации выявления точечных мутаций и полиморфизма генов.

Авторы:

Издание: Молекулярная генетика ,микробиология и вирусология
Год издания: 2001
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 2001.-N 2.-С.19-23
Просмотров: 29