ИММУНОЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКАЯ ЛОКАЛИЗАЦИЯ БЕЛКОВ НА ПОЛИТЕННЫХ ХРОМОСОМАХ ДРОЗОФИЛЫ С ПОМОЩЬЮ ИММУННОЙ ТЕХНИКИ МЕЧЕНИЯ ЗОЛОТОМ

Аннотация:

Используя антитела, меченные золотом, разработали и апробировали иммуноэлектронно-микроскопический (ИЭМ) метод локализации белков на политенных хромосомах Drosophila melanogaster, в основу которого взяты процедуры, широко применяемые для непрямого иммунофлуоресцентного (ИФ) окрашивания давленых препаратов хромосом. Возможности ИЭМ-метода оценивали с помощью специфических антител против белков, ранее локализованных как в деконденсированных районах (в междисках и пуффах), так и в компактных районах (дисках) политенных хромосом. Во всех экспериментах данные ИЭМ сравнивали с результатами ИФ-окрашивания для одноименных районов хромосом. Для разрыхленных районов хромосом показано, что ИЭМ позволяет с высокой точностью осуществить локализацию сигнала в тонких дисках, междисках и пуффах, что соответствует данным ИФ-окрашивания. Такое соответствие, однако, отсутствует для плотных дисков: в компактных структурах с яркой флуоресценцией мечение золотом выявляется лишь по краям этих структур и отсутствует в их внутренних частях. Наблюдаемый эффект обусловлен, вероятно, плохим проникновением антител, конъюгированных с частицами золота, в плотно упакованные структуры. Полученные данные позволяют заключить, что использование ИЭМ-метода для тонкой топографии белков на политенных хромосомах ограничено декомпактизованными районами, что следует учитывать при проведении ИЭМ-работ по локализации белков на политенных хромосомах.

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 2003
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2003.-N 3.-С.235-242
Просмотров: 74