ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА RT-PCR В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ УРОВНЯ ЭКСПРЕССИИ МАЛЫХ СТАБИЛЬНЫХ РНК В КЛЕТКАХ ЭПИДЕРМОИДНОЙ КАРЦИНОМЫ ЧЕЛОВЕКА А431

Аннотация:

Для исследования уровня содержания in vivo малых стабильных РНК, синтезируемых ДНК-зависимой РНК-полимеразой III, был применен метод RT-PCR в реальном времени с использованием флуоресцентного красителя SYBR Green I. RT-PCR в реальном времени в настоящее время является самым чувствительным и точным методом количественного определения РНК в клетке и широко используется для изучения матричных РНК. Был исследован уровень экспрессии генов 5S рРНК, тРНК и Аlu-последовательности в клетках эпидермоидной карциномы человека А431, находящихся в различных состояниях: с удлиненным временем генерации при культивировании в бессывороточной среде, активированных ЭФР в низкой концентрации и находящихся в состоянии апоптоза, вызванного ЭФР в высокой концентрации. В случае каждой конкретной РНК были оптимизированы условия (количество кДНК и концентрация специфичных праймеров) проведения амплификации соответствующей кДНК с учетом уровня содержания данной РНК в клетке. В результате проведенного исследования нами было показано, что экспрессия различных генов класса III — генов 5S рРНК, тРНKiMet1 и Alu-последовательности — по-разному регулируется при воздействии на клетку внешних стимулов, вызывающих удлинение времени генерации, активацию или апоптоз. Таким образом, метод RT-PCR в реальном времени весьма перспективен для изучения содержания в клетке не только матричных, но и малых стабильных РНК.

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 2003
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2003.-N 4.-С.392-401
Просмотров: 31