МИТОГЕННОЕ И ТОКСИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ ФИТОГЕМАГГЛЮТИНИНА НА ЛИМФОЦИТЫ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА В КУЛЬТУРЕ

Аннотация:

Целью настоящего исследования было изучение динамики соотношения стимулирующего и токсического действия ФГА при двух наиболее часто употребляемых конечных концентрациях рабочего диапазона — 25 и 50 мкг/мл, определяемых по изменению общего количества лимфоидных клеток в культуре в процессе 3-суточного культивирования, их жизнеспособности и пролиферативной активности. Мононуклеары, выделенные в стерильных условиях из крови здоровых доноров с помощью градиентного центрифугирования (1,077) на фиколле ("Pharmacia", Швеция), трижды отмывали средой 199 и помещали в среду RPMI-1640, содержащую 10% пуловой сыворотки человека группы AB(IV), 0,01 М буфера HEPES, 1% глютамина и антибиотик гентамицин. Культивирование лимфоцитов с ФГА проводили в 96-луночных планшетах при концентрации клеточной взвеси 1 • 106 лимфоцитов в 1 мл среды при 37 С по ранее описанной методике. В лунки помешали по 200 мкл культуры, используя 6 дублирующих лунок. Лиофилизированный препарат ФГА (Phytohemagglntinin-Р фирмы "Difco". США) разводили согласно инструкции в 5 мл дистиллированной воды, разливали в полиэтиленовые пробирки и хранили при —18—20'С. Использовали ФГА в конечной концентрации в культуре 25 и 50 мкг/ мл, добавляя по 20 мкл в каждую лунку; в контрольные лунки ФГА не вносили. Клетки культивировали в двух дублирующих планшетах: для определения количества и жизнеспособности клеток и для определения пролиферативной активности с 3 Нтимидином. Клетки исследовали до начала стимуляции и через 6, 16, 24, 48 и 72 ч от начала культивирования.

Авторы:

Издание: Иммунология
Год издания: 2003
Объем: 4с.
Дополнительная информация: 2003.-N 4.-С.205-208
Просмотров: 297